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最后更新：2022-12-16
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生產(chǎn)企業(yè)：北京百歐泰生物科技有限公司
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產(chǎn)品詳細介紹服務簡介
細菌表達系統(tǒng)是一種比較理想的蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)，它是生產(chǎn)重組蛋白和抗體的優(yōu)先選擇，而且許多細菌已經(jīng)被很好地研究利用。原核蛋白表達系統(tǒng)是常用的表達系統(tǒng)，在大量細菌中，大腸桿菌和枯草芽孢桿菌細胞系是常用的重組蛋白表達宿主，具有遺傳背景清楚、成本低、表達量高和表達產(chǎn)物分離純化相對簡單等優(yōu)點。
大腸桿菌和枯草芽孢桿菌可以在適宜條件下以很低的成本快速復制，而且表達水平高，這種特性使其成為大規(guī)模生產(chǎn)的有效和經(jīng)濟的方式。此外，他們的基因組已完全測序，遺傳背景和代謝途徑眾所周知。另外，由于結(jié)構(gòu)簡單，細菌比真核生物更容易轉(zhuǎn)染。這些優(yōu)勢特征使表達過程更容易和更快速。
但在某些方面，原核蛋白表達系統(tǒng)也有其局限性。雖然，可以利用細菌比較容易地表達具有少量修飾的蛋白質(zhì)，但需要考慮到細菌中沒有細胞核，高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。而這些結(jié)構(gòu)在細胞運輸和翻譯后修飾（PTM）過程中是必需的。因此，細菌表達系統(tǒng)不能表達膜結(jié)合蛋白，例如胰島素受體、血型糖蛋白以及某些酶等。由于很多蛋白質(zhì)在正確折疊中需要這種修飾，而細菌無法完成修飾，導致細菌中產(chǎn)生的很多蛋白質(zhì)是無活性的并且不起作用。由此看來，客戶必須根據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能特性選擇合適的蛋白表達系統(tǒng)。
服務內(nèi)容
百歐泰生物具有多種表達宿主菌，客戶可以根據(jù)實際需要，選用不同融合標簽蛋白、不同抗性、不同作用元件的表達載體和不同性質(zhì)的表達宿主。本公司可提供的服務包括以下幾類，客戶可以提供目的基因序列或建好的表達質(zhì)粒，本公司提供一站式基因合成和蛋白表達與純化服務或重組蛋白表達與純化服務。
實驗原理
在原核蛋白表達體系中，外源基因通常需要誘導劑的誘導才能進行表達，以E.coli（大腸桿菌表達系統(tǒng)）為例，使用誘導劑IPTG誘導表達原理如下：
原核生物絕大多數(shù)的基因按功能相關(guān)性成簇地排列，且密集于染色體上，共同形成一個轉(zhuǎn)錄單位——操縱子，也稱基因表達的協(xié)同單位。E.coli的乳糖操縱子含Z、Y、A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）、通透酶（permease）和乙�；D(zhuǎn)移酶（transacetylase)；此外還有調(diào)控基因：操縱序列O（operator）、啟動+序列P（promoter）；而I(編碼Lac阻遏物，Lac repressor)不屬于乳糖操縱子。
Lac阻遏物是一種具有4個相同亞基的四級結(jié)構(gòu)蛋白，都有一個與誘導劑結(jié)合的位點。在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)，Lac阻遏物（即阻遏蛋白）能與操縱基因O結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，阻止了轉(zhuǎn)錄的路徑，從而抑制轉(zhuǎn)錄啟動。而當有誘導劑（這里指IPTG）存在時，誘導劑可與阻遏蛋白結(jié)合，使阻遏蛋白構(gòu)象發(fā)生變化，導致阻遏物從操縱基因O上解離下來，RNA聚合酶不再受阻礙，啟動子P開始發(fā)生轉(zhuǎn)錄，啟動反應開始發(fā)生轉(zhuǎn)錄。
在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘恰瓷砩系恼T導劑。而在實驗中，通常選用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作為誘導劑，IPTG是一種作用很強的誘導劑，不被細菌代謝且十分穩(wěn)定，因此實驗室使用較多。
實驗步驟
測序驗證
序列比對
重組質(zhì)粒酶切
蛋白表達分析鑒定（11度低溫誘導體系）
重組蛋白親和純化（Ni親和樹脂一步親和純化）
純化后蛋白Sumo蛋白酶酶切
Sumo蛋白酶酶切后第二次親和純化
得到酶切后目的蛋白
實驗服務流程
雙方溝通一致后確定實驗方案，確定服務要求-簽訂合同—預付款-開始實驗-成果交付
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